單硝酸異山梨酯（ISMN）為二硝酸異山梨酯的主要生物活性代謝物,適用于冠心病心絞痛。
硝酸異山梨酯與2-單硝酸異山梨酯
色譜條件與系統適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(25:75)為流動相；檢測波長為210nm。理論板數按單硝酸異山梨酯峰計算，應不低于3000。單硝酸異山梨酯峰與2-單硝酸異山梨酯峰的分離度應符合規定，與硝酸異山梨酯峰的分離度應不小于6.0。
測定法 取本品，加流動相制成每1ml中含1mg的溶液，作為供試品溶液；另取硝酸異山梨酯對照品與2-單硝酸異山梨酯對照品適量，加流動相分別制成每1ml中含5ug的溶液作為對照品溶液(1)、(2)。照含量測定項下的色譜條件，取對照品溶液(2)20ul注入液相色譜儀，調節檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的20%～25%；再取供試品溶液與對照品溶液(1)、(2)各20 ul分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。
該條件下測得三批樣品中硝酸異山梨酯與2-單硝酸異山梨酯的結果見表1。
根據以上結果及《英國藥典》2000年版和《歐洲藥典》5.0版中的單硝酸異山梨酯中硝酸異山梨酯與2-單硝酸異山梨酯的指標，結果規定：供試品溶液色譜圖中如有硝酸異山梨酯與2-單硝酸異山梨酯雜質峰，其各自的峰面積，均不得大于對照品溶液(1)、(2)的主峰面積1/2(0.5%)。
1.zui小檢出量和檢出限度
取2-單硝酸異山梨酯對照品適量,用流動相制成濃度為每1ml含0.5mg的溶液,再逐級稀釋，按上述色譜條件進樣20ml。結果測得2-單硝酸異山梨酯zui小檢測濃度為0.05mg/ml(2<S/N<3) ,檢出限度為0.005%。
取硝酸異山梨酯對照品適量,用甲醇制成濃度為每1ml含0.5mg的溶液,再用流動相逐級稀釋，按上述色譜條件進樣20ml。結果測得硝酸異山梨酯zui小檢測濃度為0.15mg/ml (2<S/N<3) ,檢出限度為0.015%。
2.對照溶液的線性關系試驗
2-單硝酸異山梨酯 精密稱取2-單硝酸異山梨酯約12.5mg，置25ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0ml，分別置100ml量瓶中，各加流動相稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液各20ml，分別注入液相色譜儀，記錄峰面積見表2。
以峰面積（A）對濃度（C）作線性回歸，得線性回歸曲線為：
A＝12627.19C+733.08，r＝0.9999。
試驗結果表明，濃度在0.50～10.08μg/ml，其峰面積與濃度呈良好的線性關系。
硝酸異山梨酯 精密稱取硝酸異山梨酯約12.5mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0ml，分別置100ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液各20ml，分別注入液相色譜儀，結果見表3。
以峰面積（A）對濃度（C）作線性回歸，得線性回歸曲線為：
A＝19806.47C+1060.90，r＝0.9999。
試驗結果表明，濃度在0.51～10.22μg/ml，其峰面積與濃度呈良好的線性關系
3.精密度試驗
分別取上述的對照溶液20ml依次注入液相色譜儀，記錄測得的峰面積，重復進樣6次，結果見表4、表5。
試驗結果表明, 精密度良好。
4.溶液的穩定性測定
制備2-單硝酸異山梨酯對照液、硝酸異山梨酯對照液和供試品溶液，分別于0、1、2、4、8小時精密量取20ml依次注入液相色譜儀，記錄色譜圖,用外標法計算雜質的含量，結果見表6。
試驗結果表明，硝酸異山梨酯與2-單硝酸異山梨酯檢查測定溶液在8小時內基本穩定。
5.回收率試驗
精密稱取2-單硝酸異山梨酯約12.5mg，置25ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1.0ml，置100ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻作為對照溶液(1)；精密稱取硝酸異山梨酯約12.5mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1.0ml，置100ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻作為對照溶液(2)。精稱單硝酸異山梨酯樣品約10mg于10ml量瓶中(9份)，分別制成含兩對照液0.4%、0.5%、0.6%的溶液各三份，分別精密量取上述溶液20μl依次注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算2-單硝酸異山梨酯與硝酸異山梨酯的加入量。測定結果見表7、表8。
2-單硝酸異山梨酯的平均回收率為100.3%；RSD為0.39%
硝酸異山梨酯的平均回收率為100.7%；RSD為1.02%
結論：由以上結果知，本品中硝酸異山梨酯與2-單硝酸異山梨酯測定方法準確度
較高,驗證指標良好,按上述檢測方法訂入質量標準中。
