單硝酸異山梨酯（ISMN）為二硝酸異山梨酯的主要生物活性代謝物,適用于冠心病心絞痛。

硝酸異山梨酯與2-單硝酸異山梨酯

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(25:75)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm。理論板數(shù)按單硝酸異山梨酯峰計(jì)算，應(yīng)不低于3000。單硝酸異山梨酯峰與2-單硝酸異山梨酯峰的分離度應(yīng)符合規(guī)定，與硝酸異山梨酯峰的分離度應(yīng)不小于6.0。

測(cè)定法  取本品，加流動(dòng)相制成每1ml中含1mg的溶液，作為供試品溶液；另取硝酸異山梨酯對(duì)照品與2-單硝酸異山梨酯對(duì)照品適量，加流動(dòng)相分別制成每1ml中含5ug的溶液作為對(duì)照品溶液(1)、(2)。照含量測(cè)定項(xiàng)下的色譜條件，取對(duì)照品溶液(2)20ul注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的20%～25%；再取供試品溶液與對(duì)照品溶液(1)、(2)各20 ul分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

該條件下測(cè)得三批樣品中硝酸異山梨酯與2-單硝酸異山梨酯的結(jié)果見表1。

根據(jù)以上結(jié)果及《英國(guó)藥典》2000年版和《歐洲藥典》5.0版中的單硝酸異山梨酯中硝酸異山梨酯與2-單硝酸異山梨酯的指標(biāo)，結(jié)果規(guī)定：供試品溶液色譜圖中如有硝酸異山梨酯與2-單硝酸異山梨酯雜質(zhì)峰，其各自的峰面積，均不得大于對(duì)照品溶液(1)、(2)的主峰面積1/2(0.5%)。  

1.zui小檢出量和檢出限度

取2-單硝酸異山梨酯對(duì)照品適量,用流動(dòng)相制成濃度為每1ml含0.5mg的溶液,再逐級(jí)稀釋，按上述色譜條件進(jìn)樣20ml。結(jié)果測(cè)得2-單硝酸異山梨酯zui小檢測(cè)濃度為0.05mg/ml(2<S/N<3) ,檢出限度為0.005%。

取硝酸異山梨酯對(duì)照品適量,用甲醇制成濃度為每1ml含0.5mg的溶液,再用流動(dòng)相逐級(jí)稀釋，按上述色譜條件進(jìn)樣20ml。結(jié)果測(cè)得硝酸異山梨酯zui小檢測(cè)濃度為0.15mg/ml (2<S/N<3) ,檢出限度為0.015%。

2.對(duì)照溶液的線性關(guān)系試驗(yàn)

2-單硝酸異山梨酯   精密稱取2-單硝酸異山梨酯約12.5mg，置25ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0ml，分別置100ml量瓶中，各加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液各20ml，分別注入液相色譜儀，記錄峰面積見表2。

以峰面積（A）對(duì)濃度（C）作線性回歸，得線性回歸曲線為：

A＝12627.19C+733.08，r＝0.9999。

試驗(yàn)結(jié)果表明，濃度在0.50～10.08μg/ml，其峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系。

硝酸異山梨酯    精密稱取硝酸異山梨酯約12.5mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0ml，分別置100ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液各20ml，分別注入液相色譜儀，結(jié)果見表3。

以峰面積（A）對(duì)濃度（C）作線性回歸，得線性回歸曲線為：

A＝19806.47C+1060.90，r＝0.9999。

試驗(yàn)結(jié)果表明，濃度在0.51～10.22μg/ml，其峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系

3.精密度試驗(yàn)

分別取上述的對(duì)照溶液20ml依次注入液相色譜儀，記錄測(cè)得的峰面積，重復(fù)進(jìn)樣6次，結(jié)果見表4、表5。

試驗(yàn)結(jié)果表明, 精密度良好。

4.溶液的穩(wěn)定性測(cè)定

制備2-單硝酸異山梨酯對(duì)照液、硝酸異山梨酯對(duì)照液和供試品溶液，分別于0、1、2、4、8小時(shí)精密量取20ml依次注入液相色譜儀，記錄色譜圖,用外標(biāo)法計(jì)算雜質(zhì)的含量，結(jié)果見表6。

試驗(yàn)結(jié)果表明，硝酸異山梨酯與2-單硝酸異山梨酯檢查測(cè)定溶液在8小時(shí)內(nèi)基本穩(wěn)定。

5.回收率試驗(yàn)

精密稱取2-單硝酸異山梨酯約12.5mg，置25ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1.0ml，置100ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻作為對(duì)照溶液(1)；精密稱取硝酸異山梨酯約12.5mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1.0ml，置100ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻作為對(duì)照溶液(2)。精稱單硝酸異山梨酯樣品約10mg于10ml量瓶中(9份)，分別制成含兩對(duì)照液0.4%、0.5%、0.6%的溶液各三份，分別精密量取上述溶液20μl依次注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算2-單硝酸異山梨酯與硝酸異山梨酯的加入量。測(cè)定結(jié)果見表7、表8。

2-單硝酸異山梨酯的平均回收率為100.3%；RSD為0.39%

硝酸異山梨酯的平均回收率為100.7%；RSD為1.02%

 結(jié)論：由以上結(jié)果知，本品中硝酸異山梨酯與2-單硝酸異山梨酯測(cè)定方法準(zhǔn)確度

較高,驗(yàn)證指標(biāo)良好,按上述檢測(cè)方法訂入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中。